Per preparare i campioni per l'analisi SEM, si possono seguire le seguenti fasi:
1. Fissazione primaria con aldeidi: Questa fase consiste nel fissare le proteine del campione utilizzando aldeidi. Le aldeidi aiutano a preservare la struttura delle proteine e a prevenirne la degradazione.
2. Fissazione secondaria con tetrossido di osmio: Dopo la fissazione primaria, il campione viene sottoposto a fissazione secondaria con tetrossido di osmio. Questa fase aiuta a fissare i lipidi nel campione e fornisce un contrasto per l'imaging.
3. Serie di disidratazione con solvente: Il campione viene quindi disidratato utilizzando una serie di solventi come etanolo o acetone. La disidratazione rimuove l'acqua dal campione e lo prepara all'essiccazione.
4. Essiccazione: Una volta disidratato, il campione deve essere essiccato. Questa operazione può essere eseguita con diversi metodi, come l'essiccazione al punto critico, la liofilizzazione o semplicemente l'essiccazione all'aria. L'obiettivo è rimuovere ogni traccia di solvente dal campione.
5. Montaggio su stub: Il campione essiccato viene poi montato su uno stub, un piccolo cilindro o disco metallico. Lo stub fornisce una piattaforma stabile per il campione durante l'imaging.
6. Rivestimento sputter con materiale conduttivo: Per prevenire la carica e migliorare la conduttività, il campione viene rivestito con un sottile strato di materiale conduttivo, come l'oro o il carbonio, utilizzando una macchina per il rivestimento sputter. Questo rivestimento garantisce che il fascio di elettroni possa interagire correttamente con il campione durante l'analisi SEM.
È importante notare che le tecniche specifiche di preparazione del campione possono variare a seconda della natura del campione e dei requisiti specifici dell'analisi SEM. Pertanto, è essenziale consultare le linee guida e i protocolli del produttore dello strumento per la preparazione del campione.
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