La preparazione dei campioni per l'analisi SEM (Microscopia elettronica a scansione) comporta diverse fasi critiche per garantire che il campione sia correttamente conservato e pronto per l'imaging dettagliato.
7 passi essenziali da seguire
1. Fissazione primaria con aldeidi
Questa fase consiste nel fissare le proteine del campione utilizzando aldeidi. Le aldeidi aiutano a preservare la struttura delle proteine e a prevenirne la degradazione.
2. Fissazione secondaria con tetrossido di osmio
Dopo la fissazione primaria, il campione viene sottoposto a fissazione secondaria con tetrossido di osmio. Questa fase aiuta a fissare i lipidi nel campione e fornisce un contrasto per l'imaging.
3. Serie di disidratazione con solvente
Il campione viene quindi disidratato utilizzando una serie di solventi come etanolo o acetone. La disidratazione rimuove l'acqua dal campione e lo prepara all'essiccazione.
4. L'essiccazione
Una volta disidratato, il campione deve essere essiccato. Questa operazione può essere eseguita con vari metodi, come l'essiccazione al punto critico, la liofilizzazione o semplicemente l'essiccazione all'aria. L'obiettivo è rimuovere ogni traccia di solvente dal campione.
5. Montaggio su stub
Il campione essiccato viene quindi montato su uno stub, un piccolo cilindro o disco metallico. Lo stub fornisce una piattaforma stabile per il campione durante l'imaging.
6. Rivestimento sputter con materiale conduttivo
Per prevenire la carica e migliorare la conduttività, il campione viene rivestito con un sottile strato di materiale conduttivo, come l'oro o il carbonio, utilizzando una macchina per il rivestimento sputter. Questo rivestimento garantisce che il fascio di elettroni possa interagire correttamente con il campione durante l'analisi SEM.
7. Consultare le linee guida del produttore dello strumento
È importante notare che le tecniche specifiche di preparazione del campione possono variare a seconda della natura del campione e dei requisiti specifici dell'analisi al SEM. Pertanto, è essenziale consultare le linee guida e i protocolli del produttore dello strumento per la preparazione del campione.
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